Vererakkude viis klassifikatsioonitehnoloogiat on optika, mehaanika, vedelikumehaanika, elektrooniliste arvutite, rakubioloogia, immunoloogia ja muude erialade terviklik rakendus. See võimaldab mõõdetud lahusel voolata läbi mõõtepiirkonna ja tuvastada iga raku füüsikalised ja keemilised omadused ükshaaval. Meetod kiirelt voolavate rakkude või alarakkude kiireks kvantitatiivseks määramiseks ja analüüsimiseks. See suudab ühe sekundi jooksul analüüsida tuhandeid rakke ja mõõta korraga mitu rakkude parameetrit. Impedantsimeetodit kasutatakse ka viie klassi hematoloogilises analüsaatoris, nn ümbrise voolu impedantsi meetodit.
Tavapärases vererakkude loenduris jagavad punased verelibled (RBC) ja trombotsüüdid (PLT) mõõtekanalit ning hemoglobiinisisalduse (HGB) mõõtmise põhimõte on sama mis tahes tüüpi ja klassi instrumentides. Valgevereliblede loendamiseks ja klassifitseerimiseks on spetsiaalne kanal. Nüüd tutvustame lühidalt analüsaatori igas katses kasutatavaid tehnilisi meetodeid ja põhimõtteid.
1. Hemoglobiinisisalduse määramine
Hemoglobiinisisalduse määramine on lahjendatud verre hemolüütilise aine lisamine, et vabastada hemoglobiin punastest verelibledest. Viimased koos hemolüütilise ainega moodustavad hemoglobiini derivaadi, mis siseneb hemoglobiini testisüsteemi ja võrdleb seda kindla lainepikkusega (tavaliselt 530–550 nm). Värvi ja neelduvuse muutus on proportsionaalne vedeliku Hb-sisaldusega ja seade suudab näidata Hb-kontsentratsiooni.
Erinevatel vereanalüsaatorite seeriatel on hemolüütiliste ainete toetamiseks erinevad valemid ja moodustunud hemoglobiini derivaadid on samuti erinevad, kuid enamik maksimaalsetest neeldumisspektritest on ligilähedased 540 nm-le. Viimastel aastatel on paljud tippklassi analüsaatorid kasutanud punaste vereliblede hemoglobiini analüüsimiseks laserkiirguse hajutamise meetodit, et minimeerida kõrge WBC, koloemia, kõrge bilirubiini jt mõju HBG kolorimeetriale.
2. Punaste vereliblede ja trombotsüütide tuvastamine
Punaste vereliblede tuvastamine on vereanalüsaatori oluline osa. Varem kasutati punaste vereliblede tuvastamisel peamiselt impedantsi meetodit punaste vereliblede arvu ja mahu arvutamiseks, et sorteerida erineva suurusega signaale ja printida punaste vereliblede mahu jaotuse histogramm. Kuid punaste vereliblede mahu kolmemõõtmelise analüüsi (3D) teostamiseks kasutatakse nüüd optika ja elektrilise impedantsi kombinatsiooni, et saada täpsemaid tulemusi.
Näiteks kasutab Bayeri ADVIA 120 punaste vereliblede tuvastamiseks valguse hajumist ning 1 punaste vereliblede mõõtmiseks samaaegselt kahe väikese nurga all suunava valguse hajutamist ja suure nurga all hajutamist kahe mõõtesüsteemi abil ning punaste vereliblede mahu ja koguarvu mõõtmiseks. üks punane verelibled vastavalt väikese nurga all valguse muundamise energia suurusele; Suure nurga all valguse hajumine võib saada ühe hemoglobiini kontsentratsiooni, mis võimaldab täpselt saada MCV (keskmine punaste vereliblede maht), MCH (keskmine hemoglobiinisisaldus), MCHC (keskmine hemoglobiini kontsentratsioon) mõõteväärtused ja joonistada punaste vereliblede hajumise diagrammid, üksikud punased verelibled vererakkude maht ja punased verelibled Hb sisemise sisalduse histogramm ja arvutatakse sellised parameetrid nagu RWD (punaste vereliblede mahu jaotuse laius), HDW (punaste vereliblede hemoglobiini jaotuse laius).
Trombotsüütide ja punaste vereliblede mahu ilmse erinevuse tõttu on piiratud lävega lihtne eristada nende kahe poolt korraga mõõdetud fotoelektrilisi signaale. Seetõttu on täisvereanalüüsis trombotsüütide ja punaste vereliblede testimiseks seni kasutatud ühist analüüsisüsteemi. Trombotsüütide ja punaste vereliblede mõõtesignaalid aga ristuvad sageli. Näiteks võib suurte trombotsüütide impulsi signaali ekslikult pidada punaste vereliblede hulka ja loendada ning väikeste punaste vereliblede pulss võib siseneda trombotsüütide kanalisse, põhjustades eksperimentaalseid vigu. Erinevad hematoloogiliste analüsaatorite tootjad kasutavad trombotsüütide arvu häirete vähendamiseks mitmesuguseid arenenud tehnoloogiaid, näiteks pühkevoolu tehnoloogiat.
Pühkevoolu tehnoloogia (pühkevool): kuna trombotsüüdid ja punased verelibled loendatakse samas loendurakus, on punased verelibled suured ja moodustavad keskse loenduse induktsioonitsooni läbimisel suure impulsi. Tagasivoolu korral tekitab see pöörisvoolu tõttu ka tagasipöördumise. Sensoripiirkonna serva moodustunud väike impulss võimaldab elektroodil tajuda trombotsüütide suurusega võrdset väikest pulssi, mis vale suurendab trombotsüütide arv. Sweep flow tehnoloogia on punaste vereliblede ja trombotsüütide loendamine samaaegselt, punaste vereliblede loendamise augu taga on stabiilne vedeliku vool, nii et punaseid vereliblesid saab kohe maha pesta, et vältida naasmist indutseeritavasse piirkonda loetakse trombotsüütideks.